流動(dòng)相就是載體,將物質(zhì)帶到固定相里并通過(guò)固定相的流體。流動(dòng)相可以是緩沖液與有機溶劑結合的水-有機混合物,也可以是有機-有機混合物。
開(kāi)始使用流動(dòng)相溶劑進(jìn)行色譜分析前,一定要檢查溶劑是否*混溶,這是非常重要的,其次是要關(guān)注它們在混合時(shí)是否會(huì )相互反應,如果發(fā)生化學(xué)反應,會(huì )影響流動(dòng)相的使用和色譜的正確分析。
有些色譜工作者可能會(huì )說(shuō),那我采用HPLC級溶劑可以直接使用嗎?即使是HPLC級溶劑也要在使用前進(jìn)行過(guò)濾!為什么呢?主要是有些懸浮顆?;螂s質(zhì)是細微米的,人的肉眼是無(wú)法觀(guān)測到的,我們不能判斷一個(gè)清澈的溶劑就一定“*干凈”。就好比我們使用自來(lái)水,也看著(zhù)很干凈是不是?但是其實(shí)里面包含很多其它的不溶物質(zhì)等。如果你在進(jìn)行色譜分析時(shí)不將懸浮顆粒和雜質(zhì)去除,會(huì )影響HPLC系統的性能。不僅如此,因為色譜柱是多孔結構,顆粒物很可能將色譜柱堵塞,背壓升高,影響流速甚至損壞泵,因為一時(shí)的圖方便而造成了色譜柱損壞就得不償失了。
說(shuō)完了過(guò)濾,現在又來(lái)說(shuō)脫氣。我們都知道液相色譜系統里是超高壓運作的,若流動(dòng)相中所含的空氣不除去,則流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)其中的氣泡受到壓力而壓縮,流出柱子進(jìn)入檢測器時(shí)因常壓而將氣泡釋放出來(lái),會(huì )造成檢測器噪聲增大,使基線(xiàn)不穩,最終導致儀器不能正常工作,特別是梯度洗脫時(shí)特別明顯。
如何大程度地減少此類(lèi)情況的發(fā)生呢?
流動(dòng)相使用前一定要用過(guò)濾器過(guò)濾,這是非常重要的!溶劑入口過(guò)濾頭可有效濾除流動(dòng)相中的固體顆粒雜質(zhì);未經(jīng)過(guò)濾的溶劑或溶劑瓶中生長(cháng)的微生物都會(huì )降低溶劑入口過(guò)濾頭的壽命和泵的性能,因此,需要定期清洗或更換溶劑入口濾頭。溶劑入口過(guò)濾頭由高品質(zhì)316L不銹鋼制成,耐腐蝕,適用于大部分溶劑。濾頭頂端階梯式連接出口可分別于1.5mm,2.2mm,3.5mm內徑的管路連接??钍叫吞柖喾N,可供選擇。
使用前新鮮準備流動(dòng)相。最好每次分析前新調配流動(dòng)相,不要讓流動(dòng)相過(guò)夜或者長(cháng)時(shí)間存放。這樣很容易滋養微生物等。
在色譜柱前添加使用保護柱進(jìn)行過(guò)濾,避免色譜柱堵塞。液相色譜保護柱能將那些強保留的、不可吸附的化合物截留下來(lái)。樣品和流動(dòng)相的過(guò)濾可以維護保護柱對化學(xué)污染物的吸附容量,能夠更長(cháng)時(shí)間的維護柱效,保護色譜柱免受污染物的危害,在額定背壓值內和在高流速中仍保持穩定、無(wú)滲漏。